優(yōu)質(zhì)蜂王漿 摘 要： 蜂王漿是哺育蜂咽下腺分泌的富含蛋白質(zhì)和氨基酸、游離脂肪酸、微量元素和維生素等的天然功能性蜂產(chǎn)品，具有滋補(bǔ)保健和延年益壽的功能。 中國(guó)是世界蜂王漿第一生產(chǎn)國(guó)和出口國(guó)。蜂王漿不易保存，極易變質(zhì)，因而蜂王漿的品質(zhì)與其新鮮度密切相關(guān)。 現(xiàn)行的蜂王漿國(guó)標(biāo)和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)對(duì)評(píng)價(jià)和質(zhì)控具有指導(dǎo)性意義，但一些核心指標(biāo)偏低和最重要的新鮮度指標(biāo)的缺失對(duì)產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展不利。 因此，探求和建立優(yōu)質(zhì)蜂王漿評(píng)價(jià)方法勢(shì)在必行。本文根據(jù)蜂王漿成分和功能研究進(jìn)展，探索性提出優(yōu)質(zhì)蜂王漿的 10- HAD 含量至少應(yīng)為 1.8%； 同時(shí)，MRJP3 和 MRJP4 應(yīng)增加為優(yōu)質(zhì)蜂王漿新鮮度的判定指標(biāo)，其含量應(yīng)分別大于或等于 0.8g/100g 和 0.2g/100g，以期對(duì)產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有一定引領(lǐng)和指導(dǎo)意義。
第二部分
蜂王漿主蛋白含量變化可真實(shí)反應(yīng)蜂王漿新鮮度，應(yīng)納入優(yōu)質(zhì)蜂王漿質(zhì)量指標(biāo)蜂王漿具有重要的生物學(xué)功能與其含有的MRJPs密切相關(guān)[26, 42]，在蜜蜂生物學(xué)方面，MRJPs 參與決定蜂群中雌性蜂的級(jí)型分化[43, 44]，為幼蟲發(fā)育提供必要的可利用氮元素以及可能在蜜蜂行為調(diào)控中起作用等[45-47]。
另外，MRJPs 對(duì)其他動(dòng)物機(jī)體具有作用，主要表現(xiàn)為高效的抗菌活性，較強(qiáng)的免疫活性和促進(jìn)特殊細(xì)胞增殖等[48]。例如，MRJP2具顯著的有抗菌活性[49]；MRJP3在體內(nèi)外均有免疫調(diào)節(jié)作用[50]。MRJP功能證據(jù)少，發(fā)給你的文章里有很多 因而，MRJPs在蜂王漿中的含量直接影響蜂王漿的功能，是蜂王漿品質(zhì)的標(biāo)志。
蜂王漿主蛋白作為評(píng)價(jià)蜂王漿新鮮度的標(biāo)準(zhǔn)并非我們第一次提出。日本科學(xué)家Kamakura 等人在2001年提出，隨著溫度升高和儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，蜂王漿中MRJPs 的含量也顯著降低，其中一種57kD的蛋白可作為評(píng)價(jià)蜂王漿新鮮度的指標(biāo)[30]，實(shí)際上這種蛋白是MRJP1，也有人建立了ELISA法，通過準(zhǔn)確定量MRJP1濃度來評(píng)價(jià)蜂王漿新鮮度[51]，但含量在蜂王漿最高，做新鮮度指標(biāo)不 合適，并且一直未能在產(chǎn)業(yè)上應(yīng)用。
采用檢測(cè)靈敏度較高的雙相電泳和飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用的方法發(fā)現(xiàn)，在4℃ 和-20℃的存放條件下，儲(chǔ)存1年后，MRJPs含量顯著降低，特別是MRJP3、MRJP4和MRJP5；特別是室溫存放一 年后，MRJPs已經(jīng)降解嚴(yán)重，MRJP3-5已經(jīng)檢測(cè)不到；建議采用MRJP5作為評(píng)價(jià)蜂王漿新鮮度的標(biāo)準(zhǔn)[52, 53]。
最近我們通過高分辨質(zhì)譜和生化檢測(cè)驗(yàn)證對(duì)蜂王漿中的所有蛋白質(zhì)進(jìn)行了一個(gè)隨貯存溫度和時(shí)間的監(jiān)測(cè)， 發(fā)現(xiàn)蜂王漿中可溶性蛋白質(zhì)隨貯存溫度的升高和時(shí)間的加長(zhǎng)都有很大程度的降解；MRJP1-5的含量最高，且含量穩(wěn)定，占總可溶性蛋白的80%以上，易于檢測(cè)；
其中，MRJP1和MRJP2含量最高，但表現(xiàn)對(duì)溫度不敏感，在室溫和4℃存放4周降解不明顯，甚至在37℃能夠穩(wěn)定存在1周。MRJP3-5對(duì)溫度非常敏感，在室溫和4℃存放隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸降解，在室溫存放2周開始，3種蛋白含量開始顯著降低；MRJP4在這3中蛋白中含量最低，對(duì)高溫也更加敏感，在37 ℃條件下存放3天，MRJP4就已經(jīng)完全降解而檢測(cè)不到（圖2）。因此，MRJP3和MRJP4作為蜂王漿質(zhì)量（新鮮度）檢測(cè)的標(biāo)記物最佳。
周；D和E，分別為4℃存放2周和4周；F，為-20℃存放4周；G和H，分別為37℃存放3天和7天。
根據(jù)上述原理，為了準(zhǔn)確對(duì)這幾種蜂王漿主蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確定量，我們針對(duì)MRJP1-5制作了單抗，能夠明確區(qū)分這5種同源性較高的蛋白質(zhì)。利用MRJP3和MRJP4 的單抗，我們已經(jīng)研發(fā)制作成了雙夾心ELISA試劑盒， 分別對(duì)這兩種蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確定量。
雙夾心ELISA需要獲得針對(duì)受檢蛋白的一對(duì)異性抗體，先將一種特異性抗體結(jié)合到固相載體上形成固相抗體，然后和待檢樣品中的相應(yīng)抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物，洗滌后再加酶標(biāo)記的另一特異性抗體與免疫復(fù)合物中抗原結(jié)合形成酶標(biāo)抗體- 抗原-固相抗體復(fù)合物，加底物顯色，判斷抗原含量。由于采用了特異性抗體對(duì)，大大減少了假陽(yáng)性反應(yīng)。在進(jìn)行同源性較高蛋白家族中某一種蛋白的定量時(shí)更加準(zhǔn)確。
雙夾心ELISA試劑盒體系穩(wěn)定、準(zhǔn)確性高，在實(shí)際檢測(cè)中應(yīng)用非常廣泛 [54-56]，也被應(yīng)用于國(guó)家和地方檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。因而，通過對(duì)這兩款試劑盒平行性和穩(wěn)定性的多次檢測(cè)，確定這兩款試劑盒能夠做到對(duì)MRJP3和MRJP4 的準(zhǔn)確定量從而評(píng)定蜂王漿的新鮮度。
結(jié)論
基于上述研究進(jìn)展與分析測(cè)試，我們認(rèn)為優(yōu)質(zhì)蜂王漿的10-HAD含量至少應(yīng)為1.8%；同時(shí)MRJP3和MRJP4 應(yīng)增加為優(yōu)質(zhì)蜂王漿新鮮度的判定指標(biāo)，其含量應(yīng)分別大于或等于0.8g/100g和0.2g/100g。
由于理論研究和技術(shù)創(chuàng)新問題，蜂王漿新鮮度在現(xiàn)行的國(guó)標(biāo)和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)都未曾涉及，但基于目前技術(shù)發(fā)展?fàn)顩r，將MRJP3和MRJP4 作為新鮮度指標(biāo)時(shí)機(jī)基本成熟。將此新鮮度指標(biāo)作為優(yōu)質(zhì)蜂王漿指標(biāo)具有一定的創(chuàng)新，對(duì)引領(lǐng)產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。
蜂王漿對(duì)我國(guó)蜂產(chǎn)業(yè)發(fā)展至關(guān)重要，也是最具市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力、最具高附加值的蜂產(chǎn)品。作為世界蜂王漿生產(chǎn)和出口第一大國(guó)，我們不僅只是生產(chǎn)大國(guó)，而且要通過科技創(chuàng)新，形成支撐產(chǎn)業(yè)發(fā)展的理論，通過技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品創(chuàng)造，實(shí)現(xiàn)引領(lǐng)消費(fèi)，最終實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)型。
通過對(duì)近年來國(guó)內(nèi)蜂王漿成分、功能研究以及蜂王漿標(biāo)準(zhǔn)的研讀，我們?cè)诂F(xiàn)有蜂王漿質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，嘗試性提出了我國(guó)優(yōu)質(zhì)蜂王漿的標(biāo)準(zhǔn)，這對(duì)我國(guó)蜂產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。
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